Snel DNA-Goedgekeurd Ce van de Spijsverterings 5-15 Min Enzyme BsaI Biochemisch Reagens

Enzymen BsaI

de enzymen zijn een reeks gebouwde beperkingsenzymen want de snelle DNA-spijsvertering in 5-15 min. enzymen kan worden gebruikt om plasmide, genomic en virale van DNA evenals PCR producten te verteren. Alle enzymen tonen superieure activiteit in de universele buffer, vereenvoudigde zo het enzymatische systeem van de spijsverteringsreactie. Voorts verstrekt de enzymen uitstekende enzymovertolligheid, die gemakkelijke spijsvertering van substraat bovenmatige of moeilijke malplaatjes toestaan.

Het verschepen en Opslag

De componenten worden verscheept met ijspak en kunnen bij -20°C 2 jaar worden opgeslagen.

Scherpe Plaats

5 ' - GGTCTC (N)1↓-3 '

3 ' - CCAGAG (N)5↑-5 '

Geadviseerde Reactievoorwaarden

Buffer 1× FuniCut™; Broed bij 37℃ uit.

Thermische Inactivering

Incubatie bij 80℃ voor 20 min.

Kwaliteitscontrole

1. Activiteitendefinitie: 1 DNA van μg werd pPIC9K volledig verteerd met 1 μL van het enzym in 15 min bij 37℃ in een totaal reactievolume van 20 μL.

2. De verlengde Incubatie/Analyse van de Steractiviteit: Geen opspoorbare degradatie van 1 DNA van μg pPIC9K toe te schrijven aan nucleaseverontreiniging of steractiviteit kwam tijdens incubatie met 1 μL van FuniCut™ BsaI voor voor uur 3 bij 37℃. De langere incubatie kan in steractiviteit resulteren.

3. Afbinding de Analyse en van Recleavage (L/R): Na verteerd met 1μL enzym op optimale voorwaarde, kan het kringloopproduct van spijsvertering onder T4-Ligase van DNA bij 22℃ worden afgebonden. Het afbindingsproduct kan zijn recleavaged door het enzym.

4. Niet-specifieke Endonuclease Activiteit: De incubatie van 1 enzym μL met 1 μg supercoiled plasmidedna want 4 uren bij 37℃ in geen verandering van supercoiled voorwaarde resulteerden.

Instructies

1. Protocol voor Snelle Spijsvertering van verschillende DNA

1.1 combineer de volgende reactiecomponenten op ijs in de vermelde orde:

[Nota]: *For gezuiverde PCR producten. De hoeveelheid Buffer 10× FuniCut™ kan tot 2 μL worden verminderd toe te schrijven aan de resterende Ionische sterkte in de ongezuiverde PCR producten. PCR product moest gezuiverde vroegere spijsvertering zijn wanneer PCR het Product voor het klonen zal worden gebruikt.

1.2 meng me zacht (niet de draaikolk) en rotatie neer.

1.3 broed bij 37℃ uit voor 15 min (plasmidedna) of voor 15-30 min (PCR product) of voor 30-60 min (genomic DNA).

1.4 facultatief: Stel het enzym door voor 20 min buiten werking te verwarmen bij 80℃.

2. Dubbele en Veelvoudige Spijsvertering van DNA

2.1 gebruik 1 μL van elke enzym en schaal omhoog de reactievoorwaarden geschikt.

2.2 het gecombineerde volume van de enzymen in het reactiemengsel geen 1/10 van het totale reactievolume moeten zou overschrijden.

2.3 als de enzymen verschillende reactietemperaturen vereisen, begin met het enzym dat een lagere temperatuur vereist, dan toevoegen het tweede enzym en uitbroeden bij de hogere temperatuur.

3. Het verhogen van de Spijsverteringsreactie van Plasmidedna

[Nota]: Incubatie in een waterthermostaat, metaalthermostaat of zandthermostaat. Verhoog de incubatietijd als het totale reactievolume 20 μL overschrijdt.

Aantal Erkenningsplaatsen in DNA